· поліакрыламідгель павінен быць акрыламідным мономером, зыходным матэрыялам для полімерызацыі, каталізатарам і правай соллю і буфернай сумессю.
· акрыламіді BIS (N, N '- двайны метылен акрыламід) - гэта матрыца геля з формы манамера.
· персульфат амонія пачаць працэс палімерызацыі клею.Рэцэптура клею патрабуе 10% раствора персульфата амонія, прыгатаванага на вадзе.Большая частка інфармацыі паказвала на неабходнасць актыўнага выкарыстання.Аднак 10% раствор можна змясціць пры тэмпературы 4 ℃ на некалькі тыдняў без значнай страты актыўнасці.Дапоўніце да 10 мл і выкіньце, калі клей не збярэцца.
Савет: працэнт адакрыламіду секвенировании клей і бялковы клей не адно і тое ж.Калі вы выкарыстоўваеце гатовы акрыламід: раствор BIS, пераканайцеся, што вы набылі правільную бутэльку.
· TEMED (N, N, N ', N '- тетраметилэтилендиамин) - каталізатар, у карычневай бутэльцы, змяшчаецца ў халадзільнік.Дадайце непасрэдна перад заліваннем клею.
· полиакриламидном электрафарэзе шкло, якое выкарыстоўваецца ў электрафарэзе, трэба мыць перад і пасля кожнага разу.Пасля электрафарэзу вымыйце мяккай шчоткай і тканінай у гарачай вадзе з мылам, апаласніце дыстыляванай вадой і высушыце.
· вільгаць і пыл могуць выклікаць з полым палімерам.Перад электрафарэзам ачысціце шкляную пласціну сродкам для мыцця шкла і працярыце яе мяккай шчоткай.Прамыйце дыстыляванай вадой і старанна вытрыце папяровай сурвэткай.Прамыванне 70% этанолам перад праціраннем паперай дапамагае ачысціць і паскорыць высыханне.Паслядоўна дадаюць пробы акрыламіду: БІС, ваду, буферны раствор, персульфат амонію, ТЭМЕД.Добра ўзбоўтайце і неадкладна выліце.
Дэгазаваць полиакриламид перад полімерызацыі не патрабуецца.(Раней акрыламід змяшчалі ў вакуум для выдалення бурбалак, таму што кісларод перашкаджае полімерызацыі.)
Наканечнікі для ўзору гарызантальных клеевых кропак.
· пакладзеце кавалак чорнай паперы ў ніжнюю скрынку, чорны фон, каб зрабіць адтуліну для ўзору, каб бачыць больш выразна.
· рэзервуар для клею, напоўнены буферам, ледзь па-над калоідам.
· калі на краі ёсць святло, уключыце святло, хай святло свеціць калоідам.Набярыце ўзор у піпетку.
· з дапамогай аўтаматычнай піпеткі.
· у 10-200 мкм 1 рухомая кропка вадкасці можа быць выкарыстана ў большасці кропак узору.Для вельмі маленькіх адтулін для ўзору (менш за 10 мк1) больш зручна выкарыстоўваць доўгую галоўку піпеткі для секвенирования клею.
· піпеткай толькі што пагружаны ўзор, удыхаючы павольна рухомую вадкасць.Узор можа выглядаць ліпкім ад гліцэрыны, і хуткае адпампоўванне можа ўцягнуць бурбалкі паветра ў галоўку піпеткі.
· Узоры пасля ўдыху піпеткай галоўкі, будуць рухаць вадкасць галавой асцярожна па краі трубы або праціраючы паперу ўсмоктваць вадкасць галоўку па-за кроплямі.Будзьце асцярожныя, каб не высмактаць ўзор.
Змесціце ўзор у адтуліну для ўзору
· прылада для піпетавання, каб падтрымліваць невялікі ціск, прымушаць узоры злёгку перамяшчаць галоўку пераліўнай вадкасці.
· галоўка піпеткі, устаўленая ў буфер крыху вышэй кропкавых адтулін, падтрымлівае станоўчы ціск.Кончык піпеткі можна ўставіць у невялікае адтуліну.
· павольна і няўхільна выходзяць ўзоры.Наканечнік піпеткі размяшчаецца над кропкавым адтулінай для ўзору, і ўзор апускаецца ў адтуліну.Дайце ўзору апусціцца, каб запоўніць адтуліну для ўзору, а не штурхаць.
· пасля апошняй кроплі ўзору з вадкай галоўкай, вадкасць пяройдзе да другой ножкі, павольна падніміце рух вадкасці, выйдзіце з буфера
Як зрабіць вертыкальны адбор клею?
· адтуліны для ўзору вертыкальнай кропкі клею, утвораныя паміж двума кавалкамі шкла.У вельмі тонкім клеі галоўку піпеткі нельга нават уставіць паміж дзвюма шклянымі пласцінамі.Сачыце за гліцэрынай!Пастаўце галоўку піпеткі на адтуліну для ўзору, і ўзор апусціцца ў адтуліну.
· Кропкавы ўзор перад тым, не забудзьцеся паставіць вертыкальную кропку поліпрапіленавага ацылавага геля, адтуліну для ўзору прамываецца.Змыйце непалімерызаваны акрыламід і ваду, якія могуць з'явіцца на дне адтуліны для ўзору.Вада можа зрабіць адтуліну для пробы значна меншай.Выкарыстоўвайце шпрыц на 25 або 50 мл і іголку 18-га калібру.Уліце буфер для электрафарэзу і старанна прамыйце адтуліну для ўзору.
· можа быць цяжка ўбачыць адтуліну для ўзору, але ў той жа час усё астатняе лёгка.Калі ёсць лішнія дзіркі, буфер узору можна праверыць бромфенолавым сінім.
Час публікацыі: 31 сакавіка 2023 г