· поліакрыламідгель павінен быць акрыламідным мономером, зыходным матэрыялам для полімерызацыі, каталізатарам і правай соллю і буфернай сумессю.
· акрыламіді BIS (N, N '- двайны метылен акрыламід) - гэта матрыца геля з формы манамера.
· персульфат амонія пачаць працэс палімерызацыі клею. Рэцэптура клею патрабуе 10% раствора персульфата амонія, прыгатаванага на вадзе. Большая частка інфармацыі паказвала на неабходнасць актыўнага выкарыстання. Аднак 10% раствор можна змясціць пры тэмпературы 4 ℃ на некалькі тыдняў без значнай страты актыўнасці. Дапоўніце да 10 мл і выкіньце, калі клей не збярэцца.
Савет: працэнт адакрыламіду секвенировании клей і бялковы клей не адно і тое ж. Калі вы выкарыстоўваеце гатовы акрыламід: раствор BIS, пераканайцеся, што вы набылі правільную бутэльку.
· TEMED (N, N, N ', N '- тетраметилэтилендиамин) - каталізатар, у карычневай бутэльцы, змяшчаецца ў халадзільнік. Дадайце непасрэдна перад заліваннем клею.
· полиакриламидном электрафарэзе шкло, якое выкарыстоўваецца ў электрафарэзе, трэба мыць перад і пасля кожнага разу. Пасля электрафарэзу вымыйце мяккай шчоткай і тканінай у гарачай вадзе з мылам, апаласніце дыстыляванай вадой і высушыце.
· вільгаць і пыл могуць выклікаць з полым палімерам. Перад электрафарэзам ачысціце шкляную пласціну сродкам для мыцця шкла і працярыце яе мяккай шчоткай. Прамыйце дыстыляванай вадой і старанна вытрыце папяровай сурвэткай. Прамыванне 70% этанолам перад праціраннем паперай дапамагае ачысціць і паскорыць высыханне. Паслядоўна дадаюць пробы акрыламіду: БІС, ваду, буферны раствор, персульфат амонію, ТЭМЕД. Добра ўзбоўтайце і неадкладна выліце.
Дэгазаваць полиакриламид перад полімерызацыі не патрабуецца. (Раней акрыламід змяшчалі ў вакуум для выдалення бурбалак, таму што кісларод перашкаджае полімерызацыі.)
Наканечнікі для ўзору гарызантальных клеевых кропак.
· пакладзеце кавалак чорнай паперы ў ніжнюю скрынку, чорны фон, каб зрабіць адтуліну для ўзору, каб бачыць больш выразна.
· рэзервуар для клею, напоўнены буферам, ледзь па-над калоідам.
· калі на краі ёсць святло, уключыце святло, хай святло свеціць калоідам. Набярыце ўзор у піпетку.
· з дапамогай аўтаматычнай піпеткі.
· у 10-200 мкм 1 рухомая кропка вадкасці можа быць выкарыстана ў большасці кропак узору. Для вельмі маленькіх адтулін для ўзору (менш за 10 мк1) больш зручна выкарыстоўваць доўгую галоўку піпеткі для секвенирования клею.
· піпеткай толькі што пагружаны ўзор, удыхаючы павольна рухомую вадкасць. Узор можа выглядаць ліпкім ад гліцэрыны, і хуткае адпампоўванне можа ўцягнуць бурбалкі паветра ў галоўку піпеткі.
· узоры пасля ўдыху піпеткай галоўкі, будуць рухаць вадкасць галавой асцярожна па краі трубы або праціраючы паперу ўсмоктваць вадкасць галоўку па-за кроплямі. Будзьце асцярожныя, каб не высмактаць ўзор.
Змесціце ўзор у адтуліну для ўзору
· прылада для піпетавання, каб падтрымліваць невялікі ціск, прымушаць узоры злёгку перамяшчаць галоўку пераліўнай вадкасці.
· галоўка піпеткі, устаўленая ў буфер крыху вышэй кропкавых адтулін, падтрымлівае станоўчы ціск. Кончык піпеткі можна ўставіць у невялікае адтуліну.
· павольна і няўхільна выходзяць ўзоры. Наканечнік піпеткі размяшчаецца над кропкавым адтулінай для ўзору, і ўзор апускаецца ў адтуліну. Дайце ўзору апусціцца, каб запоўніць адтуліну для ўзору, а не штурхаць.
· пасля апошняй кроплі ўзору з вадкай галоўкай, вадкасць пяройдзе да другой ножкі, павольна падніміце рух вадкасці, выйдзіце з буфера
Як зрабіць вертыкальны адбор клею?
· адтуліны для ўзору вертыкальнай кропкі клею, утвораныя паміж двума кавалкамі шкла. У вельмі тонкага клею галоўку піпеткі нельга нават уставіць паміж двума шклянымі пласцінамі. Сачыце за гліцэрынай! Пастаўце галоўку піпеткі на адтуліну для ўзору, і ўзор апусціцца ў адтуліну.
· Кропкавы ўзор перад тым, не забудзьцеся паставіць вертыкальную кропку поліпрапіленавага ацылавага геля, адтуліну для ўзору прамываецца. Змыйце непалімерызаваны акрыламід і ваду, якія могуць з'явіцца на дне адтуліны для ўзору. Вада можа зрабіць адтуліну для пробы значна меншай. Выкарыстоўвайце шпрыц на 25 або 50 мл і іголку 18-га калібру. Уліце буфер для электрафарэзу і старанна прамыйце адтуліну для ўзору.
· можа быць цяжка ўбачыць адтуліну для ўзору, але ў той жа час усё астатняе лёгка. Калі ёсць лішнія дзіркі, буфер узору можна праверыць бромфенолавым сінім.
Час публікацыі: 31 сакавіка 2023 г