· поліакрыламідГель павінен пры дапамозе акрыламіднага манамера, зыходнага матэрыялу палімерызацыі, каталізатара і правай солі і буферанай сумесі разам.
· акрыламіді BIS (N, N '- Метылен падвойнага акрыламіду)- манамерная гель-матрыца.
· Персульфат амонія запусціў працэс клейкага палімерызацыі. У прэпараце клею патрабуецца 10% раствор персульфату амонія, прыгатаваны ў вадзе. Большая частка інфармацыі паказвае на неабходнасць актыўнага выкарыстання. Аднак 10% раствора можна размясціць на працягу 4 ℃ на працягу некалькіх тыдняў без істотнай страты актыўнасці. Складзіце да 10 мл і адкіньце, калі клей не ўрэгуецца.
Савет: ПрацэнтакрыламідУ паслядоўнасці клею і бялковага клею не супадаюць. Калі вы выкарыстоўваеце прэпаратны акрыламід: BIS -раствор, пераканайцеся, што атрымаеце патрэбную бутэльку.
· Temed (N, N, N ', N'- тэтраметил этилендиамин)- гэта каталізатар, у карычневай бутэльцы, размешчанай у халадзільніку. Дадайце непасрэдна перад тым, як наліць клей.
. Пасля электрафарэзу мыйце мяккай шчоткай і тканінай у гарачай мыльнай вадзе, прамыйце дыстыляванай вадой і станьце да высыхання.
· Вільготнасць і пыл могуць выклікаць полы палімер. Перад электрафарэзам ачысціце шкляную пласціну шкляным ачышчальнікам і працерці яе мяккай шчоткай. Прамыйце дыстыляванай вадой і старанна высушыце папяровай праціраннем. Прамыванне 70% этанолам перад выціраннем паперай дапамагае ачысціць і паскорыць сушкі. Дадайце ўзоры акрыламіду паслядоўна: біс, ваду, буферны раствор, персульфат амонія, мелораваны. Добра падтрасіце і адразу выліце.
Не трэба дэгас полиакриламид перад палімерызацыяй. (Акрыламід выкарыстоўваецца ў вакуум для выдалення бурбалак, таму што кісларод душыць палімерызацыю.)
Канчатковыя парады ўзору гарызантальнага клей.
· Пакладзеце кавалак чорнай паперы ў ніжнюю скрынку, чорны фон, каб зрабіць нейкую адтуліну, каб убачыць больш выразна.
.
· Калі ў краю ёсць святло, уключыце святло, дайце святлу ззяе коллоід. Умаруйце ўзор у піпетку.
· Выкарыстанне аўтаматычнага прылады Pipetting.
· У 10-200 Mu 1, 1, якая рухаецца вадкасцю, можа выкарыстоўвацца ў большасці пунктаў узору. Для вельмі невялікіх адтулін для ўзораў (менш за 10 мк1) доўгая галоўка піпеткі, якая выкарыстоўваецца для паслядоўнасці клею, зручней.
· Піпетынг проста апускаецца ў пробу, удыхаючы павольна рухаючы вадкасць. Узор можа выглядаць ліпкім з гліцэрынай, а хуткае прапампоўка можа прыцягнуць бурбалкі паветра ў галоўку піпеткі.
· Узоры пасля ўдыхання галоўкі піпеткі будуць мякка перамяшчаць вадкасць на краі трубы або выціраючы паперу, смактаць вадкую галоўку па -за кропель. Будзьце асцярожныя, каб не высмоктваць пробу.
Змесціце ўзор у адтуліну для ўзору
· Прылада піпеткі, каб захаваць невялікае ціск, зрабіце ўзоры злёгку перамясціць перапаўненне вадкай галоўкі.
· Галова піпеткі, устаўленая ў буфер, крыху вышэй, чым у плям, падтрымліваюць станоўчы ціск. Наканечнік піпеткі можна ўставіць у невялікую адтуліну.
· Павольна і няўхільна ўзоры. Наканечнік піпеткі размешчаны над адтулінай кропкі, а ўзор будзе апускацца ў адтуліну. Дазвольце ўзору апусціцца, каб запоўніць адтуліну для ўзору, а не штурхаць.
А
Як зрабіць вертыкальны адбор пробаў клей?
· Адтуліны для ўзору вертыкальнай кропкі клею ўтвараюцца паміж двума шкламі. У вельмі тонкім клей, галоўка піпеткі нават не можа быць устаўлена паміж дзвюма шклянымі пласцінамі. Глядзіце гліцэрыну! Пакладзеце галоўку піпеткі на адтуліну ўзору, і ўзор апусціцца ў адтуліну.
· Пункт пункта раней, не забудзьцеся паставіць вертыкальную кропку адтуліны поліпрапіленавага ацылавага геля. Змыйце непалімеризированным акрыламідам і вадой, якая можа з'явіцца ўнізе адтуліны ўзору. Вада можа зрабіць адтуліну ўзору значна меншай. Выкарыстоўвайце шпрыц у 25 мл або 50 мл і іголку 18-га калібра. Наліце ў буфер электрафарэзу і асцярожна прамыйце адтуліну для ўзору.
· Гэта можа быць складана ўбачыць адтуліну для ўзору, але ў тым жа, астатняе лёгка. Калі ёсць лішнія адтуліны, буфер для ўзору можа быць правераны з сінім бромафенолам.
Час паведамлення: 31-2023